地特胰岛素原料药的生产工艺优化研究

Research on the Optimization of Production Process for Diethylene Insulin API

关键词:  地特胰岛素原  地特胰岛素  原料药  酶切反应  修饰反应  DesB30

Key words:  Detemir proinsulin  Levemir  API(Active Pharmaceutical Ingredients)  enzyme reaction  

摘要:

目的 构建并表达地特胰岛素原,开发原料药生产工艺,优化柱层析、酶切反应、修饰反应等关键工艺,提升和稳定回收率,并制备得到和原研质量一致的地特胰岛素原料药。方法 通过建立DesB30工程菌来发酵表达地特胰岛素原,通过离子交换层析粗提捕获胰岛素原,再通过酶切反应切除链接肽,反相层析提纯后定点修饰十四烷基脂肪酸链,得到地特胰岛素,最后通过两步高压反相层析精纯,结晶冻干得到地特胰岛素原料药粉。结果 优化离子交换层析,提高胰岛素原的洗脱浓度,操作便于生产；优化酶切反应和修饰反应,提升并稳定回收率和目的蛋白纯度,保障最终产品质量。结论 分析结果显示,优化后工艺稳定性良好,多批次制备样品的分子量、等电点、氨基酸序列、二硫键、胰岛受体亲和力等多项指标和原研质量一致,可用于产业化生产参考。

Abstract:

目的 构建并表达地特胰岛素原，开发原料药生产工艺，优化柱层析、酶切反应、修饰反应等关键工艺，提升和稳定回收率，并制备得到和原研质量一致的地特胰岛素原料药。方法 通过建立DesB30工程菌来发酵表达地特胰岛素原，通过离子交换层析粗提捕获胰岛素原，再通过酶切反应切除链接肽，反相层析提纯后定点修饰十四烷基脂肪酸链，得到地特胰岛素，最后通过两步高压反相层析精纯，结晶冻干得到地特胰岛素原料药粉。结果 优化离子交换层析，提高胰岛素原的洗脱浓度，操作便于生产；优化酶切反应和修饰反应，提升并稳定回收率和目的蛋白纯度，保障最终产品质量。结论 分析结果显示，优化后工艺稳定性良好，多批次制备样品的分子量、等电点、氨基酸序列、二硫键、胰岛受体亲和力等多项指标和原研质量一致，可用于产业化生产参考。